VNTR

Sinônimos: DNA fingerprinting, o "Multi-Locus Probe"

Em alguns cromossomos humanos, existem certas regiões em que uma pequena seqüência de DNA é repetida várias vezes. Essas regiões, que foram, inicialmente,caracterizadas, na década de 80, por Alec Jeffreys, se constituem em diferentes marcadores genéticos e possuem segregação mendeliana. Esses marcadores possuem determinadas seqüências que se repetem (tandem repeats) até centenas de vezes e são denominados Variable Number of Tandem Repeats ou VNTR. Habitualmente, essas regiões estão localizadas entre sítios de corte de enzimas de restrição, sendo, pois, possível "cortar" essa seqüência para análise.

Na figura acima, quatro exemplos de VNTR estão representados. Sendo eles caracterizados por tamanhos diferentes, ao serem separados mediante eletroforese, em gel de agarose, colocam-se de acordo com seus respectivos tamanhos. Assim, como se representa na porção inferior da foto, pode-se comparar as bandas de maneira a determinar-se o vínculo genético entre pessoas.

A figura abaixo esquematiza a técnica empregada. O DNA inicialmente extraído das céluas é digerido por enzimas de restrição. HaeIII é uma das enzimas comumentes utilizadas (corta o DNA ao identificar seqüências 5'-GGCC-3'). Assim, várias bandas são produzidas. Nem todas as bandas produzidas oferecem interesse, pois, muitas delas não são polimórficas. Para identificação dos marcadores polimórficos que carregam VNTRs são utilizadas sondas ("probes" em inglês). Essas sondas hibridizam vários loci gênicos e são, portanto, denominadas sondas multilocais (daí o nome em inglês Multi Locus Probe).

Como esta sonda hibridiza vários loci, ao mesmo tempo, o resultado é um número muito grande de bandas, todas possuindo VNTRs. Por exemplo, considerando-se, somente, 3 alelos, é possível encontrar 3 pessoas heterozigotas e 3 homozigotas para um mesmo loci. Para diferentes números de alelos existem (n)(n+1)/2 genótipos possíveis.

 

A figura acima representa um resultado típico de investigação de vínculo genético utilizando-se a análise de VNTR. Como pode-se notar, o número de bandas é muito grande, podendo-se habitualmente identificar entre 8 e 30 bandas, por pessoa, fazendo com que a combinação genotípica seja enorme. Portanto, o poder de resolução desta técnica é muito alta, sendo o poder de exclusão, igualmente, muito alto. Em determinados casos, a probabilidade de se encontrar um outro indivíduo com o mesmo genotipo chega a 1:3.000.000.000, sendo, portanto, quase impossível encontrar uma outra pessoa com o mesmo padrão de bandas. Por isso esse exame tambem é conhecido como DNA Fingerprinting (impressão digital do DNA).

SLP                     Pagina principal                 PCR

 Perguntas?

Prof. Dr. Ayush M. Amar  Dr. Marcelo J. A. Amar

Centro de Investigação de Paternidade - Fundação Morad Ayush Amar